DF-1细胞的传代培养和保存

（一） 材料
DMEM细胞培养液：10%的DMEM细胞培养液，含10%胎牛血清。
培养温度: 39.0°C; (**大. 40.0 °C, **小 . 38.0°C)
胰酶-EDTA消化液：0.25% (w/v) 胰酶- 0.53 mM EDTA 溶液。
（二） 方法
1. 弃掉细胞培养液。
2. 用胰酶-EDTA消化液冲洗细胞单层，除掉残余的细胞培养液。
3. 向细胞瓶内加入 2.0 到 3.0 ml的胰酶-EDTA消化液，在倒置显微镜下观察细胞直到细胞单层分散开来（一般5-15分钟）。
注意: 消化细胞时禁止剧烈拍打或摇晃细胞瓶，不易消化的细胞可以放到39°C助消化。 
4. 加入6.0 到8.0 ml 的DMEM 培养基**细胞瓶，轻轻吹吸混匀消化细胞。
5. 取出部分细胞加入到新的细胞瓶中培养。
6. 在 39°C培养。
传代率:一般推荐 1:2 到 1:10传代。注：1:2指一瓶传两瓶。
（三）保存: 10%CS的DMEM细胞培养液加入5% DMSO。
保存温度: 液氮保存